2 × Taq Plus PCR -seos

Erittäin puhdas, erittäin tehokas ja erittäin tarkka Taq-DNA-polymeraasi.

Taq Plus DNA -polymeraasi on Taq- ja Pfu -DNA -polymeraasin seos. Sillä on 5'-3'-eksonukleaasiaktiivisuus ja 3'-5'-eksonukleaasiaktiivisuus, jolla on korkea monistustehokkuus ja alhainen yhteensopimattomuus. Verrattuna Taq DNA -polymeraasiin, Taq Plus DNA -polymeraasin etuna on lisääntynyt monistuspituus (yksinkertaisia malleja voidaan monistaa tehokkaasti 20 kb: iin asti ja monimutkaisia malleja jopa 10 kb: n asti), hyvä tarkkuus jne. Pfu -DNA -polymeraasiin verrattuna on etuna nopea vahvistusnopeus ja korkea reaktiotehokkuus.

Kissa. Ei	Pakkauskoko
4992791	1 ml
4992792	5*1 ml
4992793	5 × 1 ml

Lähetä meille sähköpostia

Tuotetiedot

Kokeellinen esimerkki

Usein kysytyt kysymykset

Tuotetunnisteet

Toiminnan määritelmä

1 Yksikkö (U) Taq Plus DNA -polymeraasiaktiivisuus määritellään entsyymimääräksi, joka tarvitaan 10 nmol deoksinukleotidien sisällyttämiseksi happoliukoisiin aineisiin 74 ° C: ssa 30 minuutin kuluessa käyttäen aktivoitua lohen siittiöiden DNA: ta templaattina/alukkeena.

Laadunvalvonta

Puhtaus SDS-PAGE-ilmaisulla on yli 99%; Eksogeenisen nukleaasin aktiivisuutta ei havaita; Yhden kopion geeni ihmisen genomissa voitaisiin monistaa tehokkaasti; Ei merkittävää aktiivisuuden muutosta, kun sitä säilytetään huoneenlämmössä viikon ajan.

Tärkeimmät tekniset parametrit

Taq Plus DNA -polymeraasilla on 5'-3'-eksonukleaasiaktiivisuus ja 3'-5'-eksonukleaasiaktiivisuus. PCR -tuotteet voidaan kloonata suoraan TA -vektoriin. Jos kloonaustehokkuutta on parannettava, on suositeltavaa puhdistaa PCR-tuotteet ensin ja suorittaa A-tailing ennen kloonausta TA-vektoriin.

Yhden putken Taq Plus PCR -seos (National High-Tech Product Certification)

■ Taq Plus PCR Mix on parantanut PCR -reaktion spesifisyyttä ja herkkyyttä ja voi monistaa monimutkaisia malleja, joilla on korkea GC -pitoisuus, toissijainen rakenne ja vastaavat. Jopa kaksi kohdemallin kopiota voidaan vahvistaa, mikä takaa tarkemmat kokeelliset tulokset.

■ Ainutlaatuinen Taq Plus PCR Mix -kaava tekee koko reaktiojärjestelmästä erittäin vakaan, eikä aktiivisuus vaikuta toistuvaan jäädytys-sulatukseen tai pitkäaikaiseen säilytykseen 4 ° C: ssa.

■ Vakaa ja tehokas esivalmistettu PCR-seosratkaisu voi tehdä toimenpiteestä nopean ja yksinkertaisen, mikä vähentää huomattavasti työvoimavaltaa ja näytteenottovirhettä. Sekoitus sisältää myös korkean suorituskyvyn PCR-tehostajan ja optimoijan, mikä vähentää PCR-olosuhteiden vaatimuksia.

■ Tässä tuotteessa on sekä väriaineita sisältäviä että väriaineettomia järjestelmiä. Väriainepitoiset PCR Mix -tuotteet voidaan elektroforeesata suoraan PCR: n jälkeen lisäämättä näytepuskuria.

Sovellukset

Sitä käytetään yleisesti suuren tarkkuuden ja monimutkaisen rakenteen, kuten korkean GC -sisällön ja toissijaisen rakenteen, vahvistamiseen. Useimmissa tapauksissa se voi korvata Taq DNA -polymeraasin.

Kaikki tuotteet voidaan räätälöidä ODM/OEM: lle. Yksityiskohtia varten,napsauta Mukautettu palvelu (ODM/OEM)

Edellinen: 2 × Taq Platinum PCR -seos

Seuraava: 2 × GC-rikas PCR-seos

Käytä genomista DNA: ta mallina 1 kb: n fragmentin monistamiseen.
Ota PCR -reaktion jälkeen 5 μl elektroforeesin havaitsemiseen.

K: Ei vahvistuskaistoja

A-1-malli

■ Malli sisältää proteiiniepäpuhtauksia tai Taq -estäjiä jne. - Puhdista DNA -templaatti, poista proteiiniepäpuhtaudet tai poista templaatin DNA puhdistussarjoilla.

■ Mallin denaturointi ei ole valmis — - Nosta denaturoitumislämpötilaa asianmukaisesti ja pidennä denaturointiaikaa.

■ Mallin huonontuminen-Valmistele malli uudelleen.

A-2 Pohjamaali

■ Alukkeiden huono laatu-syntetisoi aluke uudelleen.

■ Alukkeen hajoaminen —— Liuotetaan suuripitoiset alukkeet pieneen tilavuuteen säilyttämiseksi. Vältä moninkertaista jäätymistä ja sulamista tai pitkäaikaista 4 ° C: n kylmäsäilytystä.

■ Alukkeiden väärä suunnittelu (esim. Alukkeen pituus ei ole riittävä, dimeeri on muodostettu alukkeiden väliin jne.) -Suunnittele alukkeet uudelleen (vältä alukkeen dimeerin ja toissijaisen rakenteen muodostumista)

A-3 Mg²⁺keskittymistä

■ Mg²⁺ pitoisuus on liian alhainen —— Nosta Mg oikein²⁺pitoisuus: Optimoi Mg²⁺ pitoisuus 1 - 3 mM: n reaktiosarjoilla 0,5 mM: n välein optimaalisen Mg: n määrittämiseksi²⁺ pitoisuus kullekin templaatille ja alukkeelle.

A-4 Hehkutuslämpötila

■ Korkea hehkutuslämpötila vaikuttaa pohjamaalin ja templaatin sitoutumiseen. - Pienennä hehkutuslämpötilaa ja optimoi tila 2 ° C: n gradientilla.

A-5 Jatkoaika

■ Lyhyt jatkoaika —— Pidennä pidennysaikaa.

K: Väärin positiivinen

Ilmiöt: Negatiiviset näytteet osoittavat myös kohdesekvenssikaistat.

A-1 PCR: n kontaminaatio

■ Kohdasekvenssin tai monistustuotteiden ristikontaminaatio - Älä varovasti pipetoimalla näytettä, joka sisältää kohdesekvenssin negatiiviseen näytteeseen, tai läikyttämästä niitä ulos sentrifugiputkesta. Reagenssit tai laitteet on autoklavoitava olemassa olevien nukleiinihappojen poistamiseksi, ja kontaminaation olemassaolo on määritettävä negatiivisilla kontrollikokeilla.

■ Reagenssien likaantuminen ——Aliquot reagenssit ja säilytä alhaisessa lämpötilassa.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ pitoisuus on liian alhainen —— Nosta Mg oikein²⁺ pitoisuus: Optimoi Mg²⁺ pitoisuus 1 - 3 mM: n reaktiosarjoilla 0,5 mM: n välein optimaalisen Mg: n määrittämiseksi²⁺ pitoisuus kullekin templaatille ja alukkeelle.

■ Virheellinen alukemalli ja kohdesekvenssi on homologinen ei-kohdesekvenssin kanssa. —— Suunnittele alukkeet uudelleen.

K: Epäspesifinen vahvistus

Ilmiöt: PCR-monistuskaistat ovat ristiriidassa odotetun koon kanssa, joko suuria tai pieniä, tai joskus esiintyy sekä spesifisiä monistuskaistoja että epäspesifisiä monistuskaistoja.

A-1 Pohjamaali

■ Alukkeiden heikko spesifisyys

——Uudelleensuunnittele aluke.

■ Alukkeen pitoisuus on liian korkea —— Nosta denaturointilämpötilaa oikein ja pidennä denaturointiaikaa.

A-2 Mg²⁺ keskittymistä

■ Mg²⁺ pitoisuus on liian korkea —— Pienennä Mg2+ -pitoisuutta oikein: Optimoi Mg²⁺ pitoisuus 1 - 3 mM: n reaktiosarjoilla 0,5 mM: n välein optimaalisen Mg: n määrittämiseksi²⁺ pitoisuus kullekin templaatille ja alukkeelle.

A-3 Lämpöstabiili polymeraasi

■ Liiallinen entsyymimäärä - Vähennä entsyymimäärää asianmukaisesti 0,5 U: n välein.

A-4 Hehkutuslämpötila

■ Hehkutuslämpötila on liian alhainen —— Nosta lämpöä sopivasti tai ota käyttöön kaksivaiheinen hehkutusmenetelmä

A-5 PCR-sykliä

■ Liian monta PCR -sykliä - Vähennä PCR -syklien määrää.

K: Laastarit tai tahrat

A-1 Pohjamaali——Huono spesifisyys —— Suunnittele alusta uudelleen, muuta alukkeen sijaintia ja pituutta parantaaksesi sen spesifisyyttä; tai suorittaa sisäkkäisen PCR: n.

A-2-malli DNA

- - Malli ei ole puhdas - - Puhdista templaatti tai poista DNA puhdistussarjoilla.

A-3 Mg²⁺ keskittymistä

- Mg²⁺ pitoisuus on liian korkea - vähennä Mg -määrää oikein²⁺ pitoisuus: Optimoi Mg²⁺ pitoisuus 1 - 3 mM: n reaktiosarjoilla 0,5 mM: n välein optimaalisen Mg: n määrittämiseksi²⁺ pitoisuus kullekin templaatille ja alukkeelle.

A-4 dNTP

——DNTP: iden pitoisuus on liian korkea ——Pienennä dNTP: n pitoisuutta asianmukaisesti

A-5 Hehkutuslämpötila

——Liian alhainen hehkutuslämpötila ——Korota hehkutuslämpötila asianmukaisesti

A-6 sykliä

——Liian monta sykliä ——Optimoi syklin numero

K: Kuinka paljon templaatti -DNA: ta pitäisi lisätä 50 μl: n PCR -reaktiojärjestelmään?

K: Kuinka vahvistaa pitkiä fragmentteja?

Ensimmäinen askel on valita sopiva polymeraasi. Säännöllistä Taq-polymeraasia ei voida oikolukuuttaa 3'-5'-eksonukleaasiaktiivisuuden puutteen vuoksi, ja epäsuhta heikentää huomattavasti fragmenttien pidennystehokkuutta. Siksi tavallinen Taq -polymeraasi ei voi tehokkaasti monistaa kohdefragmentteja, jotka ovat suurempia kuin 5 kb. Taq -polymeraasi, jolla on erityinen muunnos tai muu korkean tarkkuuden polymeraasi, tulisi valita parantamaan laajentamisen tehokkuutta ja vastaamaan pitkän fragmentin monistamisen tarpeisiin. Lisäksi pitkien fragmenttien monistaminen edellyttää myös vastaavaa säätöä alukkeen rakenteesta, denaturointiajasta, pidennysajasta, puskurin pH: sta jne. Yleensä alukkeet, joilla on 18-24 emäsparia, voivat johtaa parempaan saantoon. Templaatin vaurioitumisen estämiseksi denaturointiaika 94 ° C: ssa on lyhennettävä 30 sekuntiin tai alle jaksoa kohden ja lämpötilan nousemisen 94 ° C: een ennen monistusta on oltava alle 1 minuutti. Lisäksi pidennyslämpötilan asettaminen noin 68 ° C: een ja pidennysajan suunnitteleminen nopeuden 1 kb/min mukaan voi varmistaa pitkien fragmenttien tehokkaan monistumisen.

K: Kuinka parantaa PCR: n vahvistustarkkuutta?

PCR -monistuksen virhetasoa voidaan pienentää käyttämällä erilaisia DNA -polymeraaseja erittäin tarkasti. Kaikkien tähän mennessä löydettyjen Taq DNA -polymeraasien joukossa Pfu -entsyymillä on alhaisin virhetaso ja suurin uskollisuus (katso oheinen taulukko). Entsyymivalinnan lisäksi tutkijat voivat edelleen vähentää PCR -mutaatiota optimoimalla reaktio -olosuhteita, mukaan lukien puskurikoostumuksen optimointi, lämpöstabiilin polymeraasin pitoisuus ja PCR -syklin lukumäärän optimointi.

Kirjoita viestisi tähän ja lähetä se meille