Seerumin/plasman kiertävä DNA -sarja

A-1 Alhainen solujen tai virusten pitoisuus lähtönäytteessä-rikastuta solujen tai virusten pitoisuutta.

A-2 Näytteiden riittämätön hajoaminen-Näytteitä ei ole sekoitettu perusteellisesti hajotuspuskuriin. On suositeltavaa sekoittaa perusteellisesti pulssivortexilla 1-2 kertaa. - riittämätön solulyysi, joka johtuu proteinaasi K: n aktiivisuuden vähenemisestä - riittämätön solujen hajoaminen tai proteiinin hajoaminen riittämättömän lämpimän kylpyajan vuoksi. On suositeltavaa leikata kudos pieniksi paloiksi ja pidentää haudutusaikaa, jotta kaikki jäännös poistetaan lysaatista.

A-3 Riittämätön DNA-adsorptio. —Ei etanolia tai vähäistä prosenttiosuutta 100% etanolin sijasta ei lisätty ennen lysaatin siirtämistä spin-pylvääseen.

A-4 Eluointipuskurin pH-arvo on liian alhainen. -Säädä pH arvoon 8,0-8,3.

Etanolin jäännös eluentissa.

- Eluentissa on pesupuskuria PW jäljellä. Etanoli voidaan poistaa sentrifugoimalla linkouskolonni 3-5 minuuttia ja sitten asettamalla se huoneenlämpötilaan tai 50 ° C: n inkubaattoriin 1-2 minuutiksi.

A-1 Näyte ei ole tuore. —Pura positiivinen näyte -DNA kontrolliksi sen määrittämiseksi, onko näytteen DNA hajonnut.

A-2 Virheellinen esikäsittely. - Syynä liiallinen nestemäisen typen hionta, kosteuden palauttaminen tai liian suuri määrä näytettä.

Esikäsittelyjen tulisi vaihdella eri näytteille. Muista jauhaa kasvinäytteet perusteellisesti nestemäisessä typessä. Eläinnäytteet homogenoidaan tai jauhetaan perusteellisesti nestemäisessä typessä. Näytteille, joiden soluseinämät ovat vaikeasti rikkoutuvia, kuten G+ -bakteereille ja hiivalle, on suositeltavaa käyttää lysotsyymiä, lyyttikaasia tai mekaanisia menetelmiä soluseinien rikkomiseen.

4992201/4992202 Kasvien genominen DNA-kitti käyttää kolonnipohjaista menetelmää, joka vaatii kloroformia uuttoa varten. Se sopii erityisen hyvin erilaisiin kasvinäytteisiin sekä kasvien kuivajauheeseen. Hi-DNAsecure Plant Kit on myös pylväspohjainen, mutta ilman fenoli/kloroformiuuttoa, joten se on turvallinen ja myrkytön. Se sopii kasveille, joissa on paljon polysakkarideja ja polyfenolipitoisuutta. 4992709/4992710 DNAquick Plant System ottaa käyttöön nestepohjaisen menetelmän. Fenoli/kloroformiuuttoa ei myöskään tarvita. Puhdistusprosessi on yksinkertainen ja nopea ilman rajoituksia näytteen aloitusmäärille, joten käyttäjät voivat säätää määrää joustavasti kokeellisten vaatimusten mukaan. Suurikokoisia gDNA -fragmentteja voidaan saada suurella saannolla.

Genominen DNA uutettiin eri tilavuuksista ihmisen kokoverinäytteitä TIANamp Blood DNA Kit -laitteella. Tulokset ovat seuraavat. Tulokset on lueteltu vain viitteellisinä, todelliset uuttotulokset riippuvat näytteiden olosuhteista.

Veritulpan DNA -uutto voidaan suorittaa käyttämällä näissä kahdessa sarjassa olevia reagensseja yksinkertaisesti muuttamalla protokolla erityiseksi ohjeeksi verihyytymän DNA -uuttoa varten. Pehmeä kopio verihyytymän DNA -uuttoprotokollasta voidaan antaa pyynnöstä.

Suspendoi tuore näyte 1 ml: lla PBS: ää, normaalia suolaliuosta tai TE -puskuria. Homogenisoi näyte täysin homogenisaattorilla ja kerää sakka putken pohjalle sentrifugoimalla. Hävitä supernatantti ja suspendoi sakka uudelleen 200 μl puskuria GA. Seuraava DNA -puhdistus voidaan suorittaa ohjeiden mukaisesti.

GDNA: n puhdistamiseen plasmasta, seerumista ja kehon nesteenäytteistä suositellaan TIANamp Micro DNA Kit -sarjaa. Viruksen gDNA: n puhdistamiseksi seerumi-/plasmanäytteistä suositellaan TIANamp Virus DNA/RNA Kit -sarjaa. Bakteeri -gDNA: n puhdistamiseksi seerumi- ja plasmanäytteistä suositellaan TIANamp Bacteria DNA Kit -pakettia (lysotsyymi on sisällytettävä positiivisiin bakteereihin). Syljenäytteille suositellaan Hi-Swab DNA Kit ja TIANamp Bacteria DNA Kit.

DNAsecure Plant Kit tai DNAquick Plant System suositellaan sieni -genomin uuttamiseen. Hiivan genomin uuttoa varten suositellaan TIANamp-hiivan DNA-sarjaa (lyyttikaasin tulee olla itse valmistettua).